adenosine deaminase Lentiviral Activation Particles (h): sc-402201-LAC

Humanes **ADA** kodiert die Adenosin-Deaminase, ein Schlüsselenzym des Purinstoffwechsels, das Adenosin und Desoxyadenosin irreversibel zu Inosin bzw. Desoxyinosin desaminiert und dadurch die intrazellulären und extrazellulären Adenosin-Pools reguliert. Indem ADA das Gleichgewicht von Nukleosiden steuert, die DNA-Synthese, Energiehomöostase und Signalübertragung über Adenosinrezeptor-Wege beeinflussen, trägt es zur Lymphozytenentwicklung und zur Funktion anderer Immunzellen bei. Eine fehlregulierte ADA-Aktivität stört den Purinabbau und kann den Nukleotidumsatz, das Redoxgleichgewicht sowie inflammatorische Signalprogramme verändern. ADA wird daher in Modellen von Immundefizienz, Immunaktivierung und metabolischem Stress umfassend untersucht, in denen Purinfluss und adenosinvermittelte Signalgebung zentrale Variablen sind.

adenosine deaminase Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ADA-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

adenosine deaminase Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ADA-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen adenosine deaminase-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ADA-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.