Plasmide CRISPR d'Activation (h) Adenosine A2A-R: sc-400807-ACT

ADORA2A code le récepteur de l’adénosine A2A (A2A-R), un récepteur couplé aux protéines G qui signale principalement via Gs, entraînant une augmentation de l’AMPc et l’activation de programmes transcriptionnels dépendants de PKA/CREB. A2A-R intègre les signaux extracellulaires d’adénosine générés lors d’un stress métabolique ou d’une inflammation, modulant des réponses telles que la production de cytokines, l’activation des leucocytes et la signalisation neuromodulatrice. Dans le système nerveux central, ADORA2A est fortement exprimé dans les circuits striataux, où il interagit fonctionnellement avec la signalisation dopaminergique pour réguler la plasticité synaptique et le contrôle moteur. Une dérégulation de la signalisation ADORA2A a été impliquée dans la neuro-inflammation et les processus neurodégénératifs, ainsi que dans l’immunosuppression associée aux tumeurs, ce qui soutient son utilité pour la dissection de voies de signalisation dans des modèles d’immunologie et de neurosciences.

Adenosine A2A-R Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADORA2A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Adenosine A2A-R Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADORA2A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADORA2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Adenosine A2A-R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADORA2A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Adenosine A2A-R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Adenosine A2A-R dans les cellules tumorales présentant une expression de ADORA2A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.