Particules Lentivirales d'Activation (h) ADAR1: sc-401611-LAC

ADAR (ADAR1) code une adénosine désaminase qui catalyse l’édition A-to-I de l’ARN au sein d’ARN double brin, remodelant les séquences de transcrits, l’épissage et les interactions dépendantes de la structure de l’ARN. En éditant des ARNdb endogènes, ADAR1 limite l’activation aberrante de l’immunité innée en réduisant leur reconnaissance par les capteurs cytosoliques de l’ARN, et module ainsi la signalisation de l’interféron de type I et les programmes de gènes inflammatoires. ADAR1 influence également la maturation des microARN et le recodage de certains transcrits, avec des effets sur les décisions de destin cellulaire et les réponses au stress. Une activité d’ADAR1 dérégulée et des paysages d’édition de l’ARN altérés ont été associés à des réponses antivirales modifiées et à une physiopathologie inflammatoire, ainsi qu’à un remodelage du transcriptome lié au cancer.

Les particules d'activation lentivirales ADAR1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ADAR dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ADAR1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ADAR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ADAR1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ADAR ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.