ADAMTS-9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402605-ACT

ADAMTS9 codifica a ADAMTS-9, uma metaloproteinase secretada dependente de zinco que participa na remodelação da matriz extracelular por meio do processamento proteolítico de proteoglicanos como agrecano e versicano. Ao regular a composição da matriz, a proteólise pericelular e a morfogênese tecidual, a ADAMTS-9 influencia a adesão celular, a migração e a comunicação cruzada de sinalização com vias ligadas ao desenvolvimento e à inflamação. Alterações na expressão ou na atividade de ADAMTS9 têm sido associadas à biologia do tecido conjuntivo e da cartilagem e têm sido investigadas em contextos de remodelação do microambiente tumoral e de fenótipos vasculares ou metabólicos. Essas características tornam a ADAMTS-9 um alvo relevante para estudos mecanísticos da dinâmica da MEC, das interações célula–matriz e da sinalização regulada por proteases.

ADAMTS-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADAMTS9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADAMTS-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADAMTS9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADAMTS9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADAMTS-9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADAMTS9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADAMTS-9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADAMTS-9 em células tumorais com expressão de ADAMTS9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.