Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAMTS-7 (h): sc-403381

Présentation

ADAMTS7 code l’ADAMTS-7, une métalloprotéase sécrétée de la famille ADAMTS qui remodèle la matrice extracellulaire par le traitement protéolytique de composants matriciels et de protéines associées. Dans les tissus humains, l’activité d’ADAMTS-7 influence les interactions cellule–matrice, le comportement des cellules musculaires lisses vasculaires et les voies de renouvellement de la matrice qui façonnent l’architecture tissulaire et le remodelage inflammatoire. Une expression ou une activité dérégulée d’ADAMTS7 a été associée à des pathologies vasculaires et à des processus liés à l’athérosclérose, et une dynamique altérée de la matrice extracellulaire peut également intervenir dans des réponses tissulaires fibreuses et dégénératives. Ces caractéristiques font d’ADAMTS-7 une cible utile pour étudier la protéostasie extracellulaire, la signalisation de la matrice et des phénotypes de remodelage pertinents pour la maladie dans des modèles cellulaires et mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAMTS-7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADAMTS7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADAMTS7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADAMTS7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADAMTS-7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADAMTS7 pour l'étude de la signalisation de ADAMTS-7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADAMTS7 essentiels à la fonction de ADAMTS-7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADAMTS7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADAMTS-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ADAMTS-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADAMTS7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADAMTS-7 plasmide HDR (h) et le ADAMTS-7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADAMTS7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADAMTS7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.