Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAMTS-18 (h): sc-405932

Présentation

ADAMTS18 code ADAMTS‑18, une métalloprotéase sécrétée de la famille ADAMTS qui contribue à l’organisation de la matrice extracellulaire grâce au traitement protéolytique de substrats associés à la matrice. En régulant le renouvellement de la matrice et les interactions cellule–matrice, ADAMTS‑18 influence des processus de remodelage tissulaire qui recoupent des voies d’adhérence, de migration et de signalisation stromale. Une expression ou une fonction altérée d’ADAMTS18 a été rapportée dans des études de biologie du développement ainsi que dans des contextes pathologiques où l’intégrité de la matrice extracellulaire et les signaux du microenvironnement sont perturbés, ce qui soutient son intérêt comme nœud mécanistique dans des phénotypes centrés sur la matrice.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAMTS-18 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADAMTS18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADAMTS18, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADAMTS18 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADAMTS-18.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADAMTS18 pour l'étude de la signalisation de ADAMTS-18, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADAMTS18 essentiels à la fonction de ADAMTS-18
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADAMTS18 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADAMTS-18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ADAMTS-18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADAMTS18. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADAMTS-18 plasmide HDR (h) et le ADAMTS-18 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADAMTS18 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADAMTS18 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.