Plasmide CRISPR d'Activation (h) ADAM9: sc-403665-ACT

ADAM9 code une métalloprotéase-désintégrine transmembranaire qui régule le clivage (shedding) de l’ectodomaine des protéines membranaires et le remodelage de l’environnement péricellulaire. Grâce au traitement protéolytique de précurseurs de facteurs de croissance et de molécules d’adhérence, ADAM9 influence les interactions cellule–cellule et cellule–matrice, la signalisation des récepteurs et la protéostasie, en s’interfaçant avec des voies liées à la signalisation EGFR/ERBB, à l’adhérence médiée par les intégrines et à des programmes migratoires. Une activité et une expression dérégulées d’ADAM9 ont été associées à des phénotypes invasifs, à des microenvironnements inflammatoires et à un remodelage tissulaire altéré, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la biologie tumorale et des processus de remodelage liés aux maladies chroniques.

ADAM9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADAM9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ADAM9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADAM9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADAM9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ADAM9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADAM9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ADAM9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ADAM9 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADAM9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.