ADAM8 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407606-ACT

ADAM8 kodiert eine membranverankerte Metalloprotease/Disintegrin, die das Shedding von Ektodomänen sowie Zell‑Zell‑ bzw. Zell‑Matrix‑Interaktionen vermittelt und damit Proteolyse mit adhäsionsabhängiger Signalübertragung verknüpft. Durch die Prozessierung ausgewählter Oberflächenrezeptoren, Zytokine und Bestandteile der extrazellulären Matrix kann ADAM8 den Leukozytentransport, inflammatorische Signalwege und Umbauprogramme beeinflussen, die Gewebe‑Mikroumgebungen prägen. Seine Aktivität greift in Signalwege ein, die Migration und Invasion steuern, darunter integrinbezogene Signalübertragung und Protease‑Netzwerke, welche den Umsatz der extrazellulären Matrix regulieren. Eine dysregulierte ADAM8‑Expression wurde mit entzündlichen Erkrankungen und verschiedenen Krebs‑Kontexten in Verbindung gebracht, was ADAM8 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung proteasegetriebener Kommunikation zwischen Immun‑ und Stromakompartimenten macht.

ADAM8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADAM8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ADAM8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADAM8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADAM8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ADAM8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADAM8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ADAM8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ADAM8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADAM8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.