Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM22 (h): sc-405581

Présentation

ADAM22 code une protéine contenant des domaines disintégrine et métalloprotéase, catalytiquement inactive, mais qui agit comme une plateforme d’adhérence et d’échafaudage de signalisation à la surface cellulaire dans le système nerveux. Elle interagit avec des ligands de la famille LGI et contribue à l’organisation des contacts synaptiques, à l’excitabilité neuronale et à la communication axone–glie en modulant des complexes protéiques membranaires. Les réseaux associés à ADAM22 recoupent des voies impliquées dans la maturation des synapses, le regroupement des canaux ioniques et la signalisation liée à la matrice extracellulaire. La dérégulation de l’expression d’ADAM22 ou de l’assemblage de ses complexes a été associée à des phénotypes neurologiques et fait l’objet d’études dans le contexte de la dysfonction synaptique et de mécanismes de maladies neurodéveloppementales ou neuropsychiatriques apparentées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM22 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADAM22 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADAM22, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADAM22 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADAM22.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADAM22 pour l'étude de la signalisation de ADAM22, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADAM22 essentiels à la fonction de ADAM22
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADAM22 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADAM22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ADAM22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADAM22. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADAM22 plasmide HDR (h) et le ADAM22 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADAM22 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADAM22 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.