Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM19 (m): sc-418986

Présentation

ADAM19 (a disintegrin and metalloproteinase 19) est une métalloprotéase ancrée à la membrane qui régule le clivage (shedding) de l’ectodomaine des protéines de surface cellulaire, influençant la signalisation des facteurs de croissance et des cytokines ainsi que les interactions cellule–cellule et cellule–matrice. Dans les tissus murins, ADAM19 contribue à des programmes du développement, notamment la morphogenèse cardiovasculaire et craniofaciale, et module les réponses inflammatoires et de remodelage. En contrôlant le processing de ses substrats à la membrane plasmique, elle s’insère dans des voies régissant la prolifération, la migration et la différenciation, avec des effets en aval sur MAPK/ERK et d’autres cascades de transduction du signal. Une activité ou une expression altérée d’ADAM19 a été associée à un remodelage tissulaire pathologique et à des phénotypes liés à la fibrose, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM19 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adam19 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adam19, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adam19 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADAM19.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adam19 pour l'étude de la signalisation de ADAM19, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adam19 essentiels à la fonction de ADAM19
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adam19 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADAM19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ADAM19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adam19. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADAM19 plasmide HDR (m) et le ADAM19 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adam19 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adam19 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.