ADAM12 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402583-ACT

ADAM12 kodiert eine membranverankerte Metalloprotease-Disintegrin (ADAM12), die Zell-Zell- und Zell-Matrix-Interaktionen durch Ektodomänen-Shedding von Oberflächenproteinen sowie durch die Modulation von Adhäsionssignalen reguliert. Es ist an Prozessen wie dem Umbau der extrazellulären Matrix, der Myogenese und dem Crosstalk von Wachstumsfaktor-Signalwegen beteiligt und beeinflusst dabei Signalachsen wie EGFR/ERBB und das TGF-β-Netzwerk über die proteolytische Prozessierung membranassoziierter Substrate. Die Expression und Aktivität von ADAM12 wurden in Kontexten von Fibrose und Krebsbiologie mit veränderten Programmen der Zellmigration, Invasion und Differenzierung in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen ADAM12 zu einem nützlichen Ziel, um proteaseabhängige Signalübertragung, stromales Remodeling und Mechanismen der Gewebeentwicklung in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

ADAM12 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADAM12-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ADAM12 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADAM12-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADAM12-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ADAM12-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADAM12-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ADAM12-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ADAM12-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADAM12-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.