ADAM10 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400883-LAC

ADAM10 kodiert eine membranverankerte, zinkabhängige Metalloprotease (A Disintegrin and Metalloproteinase 10), die das Shedding der Ektodomäne verschiedenster Substrate vermittelt, darunter Notch-Rezeptoren und -Liganden, Cadherine sowie das Amyloid-Vorläuferprotein (APP). Durch regulierte Proteolyse beeinflusst ADAM10 die Notch-Signalübertragung, den Umbau von Zell-Zell-Adhäsionen und die Verfügbarkeit von Rezeptoren/Liganden an der Zelloberfläche und prägt damit Prozesse wie Differenzierung, Migration und entzündliche Signalgebung. Eine veränderte ADAM10-Aktivität wurde mit für die Neurobiologie relevanten Signalwegen über die APP-Prozessierung in Verbindung gebracht sowie mit krebsassoziierten Phänotypen durch Effekte auf Notch-gesteuerte Transkriptionsprogramme und Adhäsionsdynamiken. Diese Eigenschaften machen ADAM10 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung proteaseabhängiger Signaltransduktion und mikroenvironmentaler Interaktionen in humanen Zellmodellen.

ADAM10 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ADAM10-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ADAM10 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ADAM10-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ADAM10-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ADAM10-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.