Particules Lentivirales d'Activation (h) ADAM10: sc-400883-LAC

ADAM10 code une métalloprotéase membranaire ancrée, dépendante du zinc (a disintegrin and metalloproteinase 10), qui assure le clivage (« ectodomain shedding ») du domaine extracellulaire de nombreux substrats, notamment des récepteurs et ligands Notch, des cadhérines et la protéine précurseur de l’amyloïde (APP). Par une protéolyse régulée, ADAM10 influence la signalisation Notch, le remodelage de l’adhésion cellule–cellule et la disponibilité des récepteurs/ligands à la surface cellulaire, modulant des processus tels que la différenciation, la migration et la signalisation inflammatoire. Une activité altérée d’ADAM10 a été associée à des voies pertinentes en neurobiologie via le métabolisme de l’APP, ainsi qu’à des phénotypes liés au cancer par ses effets sur les programmes transcriptionnels dépendants de Notch et la dynamique d’adhésion. Ces caractéristiques font d’ADAM10 un nœud d’intérêt pour étudier la transduction de signaux dépendante des protéases et les interactions avec le microenvironnement dans des modèles de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ADAM10 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ADAM10 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ADAM10 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ADAM10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ADAM10. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ADAM10 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.