ACTR-IIB Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401414-ACT

ACVR2B codifica il recettore dell’activina di tipo IIB (ACTR-IIB), un recettore transmembrana con attività chinasica serina/treonina appartenente alla superfamiglia del TGF-β, che lega ligandi quali le activine, la miostatina (GDF8) e GDF11. Il legame del ligando promuove l’assemblaggio con i recettori di tipo I e la fosforilazione di SMAD2/3, coordinando programmi trascrizionali che regolano crescita e differenziamento cellulare, rimodellamento della matrice extracellulare e segnalazione endocrina. La segnalazione dipendente da ACTR-IIB contribuisce all’omeostasi tissutale nel muscolo, nella biologia riproduttiva e metabolica e nella modulazione immunitaria, attraverso un crosstalk dipendente dal contesto con le vie MAPK e PI3K/AKT. Un’attività deregolata di ACVR2B è stata associata a fenotipi di massa muscolare alterata e a perturbazioni più ampie della segnalazione della via TGF-β/activina, implicate in fibrosi, infiammazione e rimodellamento del microambiente associato ai tumori.

ACTR-IIB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ACVR2B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ACTR-IIB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ACVR2B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ACVR2B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ACTR-IIB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ACVR2B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ACTR-IIB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ACTR-IIB nelle cellule tumorali con espressione di ACVR2B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.