Plasmide Double Nickase (h) ACTR-IIA: sc-402524-NIC

ACVR2A code le récepteur de l’activine de type IIA (ACTR‑IIA), un récepteur transmembranaire à activité sérine/thréonine kinase qui se lie aux activines et à des ligands apparentés de la superfamille du TGF‑β afin d’initier la signalisation SMAD2/3. En formant des complexes récepteurs avec des récepteurs de type I, ACTR‑IIA régule des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la différenciation et l’apoptose cellulaires, les dynamiques épithélio‑mésenchymateuses et l’homéostasie de la matrice extracellulaire. La signalisation dépendante d’ACVR2A contribue au développement des tissus ainsi qu’à la régulation immunitaire et inflammatoire, et les perturbations de cette voie sont fréquemment étudiées dans le contexte d’une dérégulation de la signalisation TGF‑β/activine. Des altérations génétiques et de signalisation impliquant ACVR2A ont été rapportées dans de multiples contextes associés à des maladies, notamment des cancers et des troubles gastro‑intestinaux, ce qui soutient son intérêt en tant que nœud pour l’exploration mécanistique des voies de signalisation.

ACTR-IIA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACVR2A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACVR2A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACVR2A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACVR2A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.