ACTR-I Double Nickase Plasmid (h): sc-401283-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACTR-I Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACTR-I Double-Nickase-Plasmid (h) und ACTR-I Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACVR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACTR-I: sc-374523
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACTR-I Double Nickase Plasmid (h) | sc-401283-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACTR-I Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401283-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACVR1 kodiert den Activin-A-Rezeptor Typ I (ACTR-I/ALK2), einen Serin/Threonin-Kinase-Rezeptor der TGF-β-Superfamilie, der BMP-Ligandensignale auf SMAD1/5/8 und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme überträgt. In menschlichen Zellen ist ACTR-I an der Regulation der osteogenen und chondrogenen Differenzierung, der Gewebemusterbildung sowie von Zellschicksalsentscheidungen beteiligt – über die kanonische BMP–SMAD-Signalübertragung und durch Crosstalk mit MAPK- und anderen Entwicklungswegen. Eine fehlregulierte ACVR1-Aktivität stört die Dynamik der BMP-Signalgebung und wird mit Erkrankungen der ektopen Ossifikation und der Skelettentwicklung in Verbindung gebracht, einschließlich der Fibrodysplasia ossificans progressiva. ACVR1 wird außerdem als Knotenpunkt genutzt, um die Assemblierung von BMP-Rezeptorkomplexen, die Kontrolle der Signalstärke und kontextabhängige transkriptionelle Outputs zu untersuchen.
ACTR-I Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACVR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACVR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACVR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACVR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.