ACTL7B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418970

Descripción general

Actl7b codifica ACTL7B, una proteína tipo actina enriquecida en el testículo, implicada en la remodelación del citoesqueleto durante la diferenciación de las espermátidas y la morfogénesis espermática. Como miembro de la familia de las actinas, ACTL7B se asocia a procesos que dan forma al complejo acrosoma–núcleo y favorecen la organización de estructuras dependientes de microfilamentos necesarias para la motilidad y la capacidad de fecundación. La alteración de la dinámica de la actina en células germinales se asocia con una formación anómala de la cabeza del espermatozoide, una reducción de la función espermática y fenotipos de subfertilidad masculina. Por ello, Actl7b constituye un punto de partida útil para estudiar la regulación del citoesqueleto, la espermiogénesis y las redes génicas que gobiernan la aptitud reproductiva en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ACTL7B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Actl7b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Actl7b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Actl7b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ACTL7B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Actl7b para la investigación de la señalización de ACTL7B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Actl7b críticos para la función de ACTL7B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Actl7b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ACTL7B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ACTL7B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Actl7b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ACTL7B (m) y el plásmido HDR ACTL7B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Actl7b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Actl7b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.