Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACTG2: sc-400007-ACT

ACTG2 code l’actine gamma‑2 du muscle lisse, un composant central de l’appareil contractile des cellules musculaires lisses viscérales, où elle polymérise en filaments d’actine qui soutiennent la génération de force et l’intégrité du cytosquelette. ACTG2 participe à la dynamique actomyosine et à des processus dépendants du cytosquelette, notamment la contraction du muscle lisse, le contrôle de la forme cellulaire et la mécanotransduction, en interagissant fonctionnellement avec la myosine et des protéines se liant à l’actine au sein de voies régulées par RhoA/ROCK. Une altération de l’expression ou de la fonction d’ACTG2 est associée à des phénotypes de motilité déficiente du muscle lisse gastro‑intestinal et génito‑urinaire et a été impliquée dans les troubles du spectre des myopathies viscérales congénitales. En tant que marqueur du muscle lisse associé à la lignée et à l’état cellulaire, ACTG2 est également utilisé pour étudier les programmes de différenciation, le remodelage du cytosquelette et les phénotypes cellulaires pilotés par la contractilité.

ACTG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACTG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACTG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACTG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACTG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACTG2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACTG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACTG2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACTG2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ACTG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.