Plasmide Double Nickase (h) ACTG1: sc-400006-NIC

ACTG1 code l’actine γ1 cytoplasmique, un composant central du cytosquelette d’actine qui soutient la forme cellulaire, la tension corticale et la génération de force. ACTG1 participe à la polymérisation et au remodelage des filaments d’actine, à l’origine de processus tels que la migration et l’adhérence cellulaires, la cytocinèse et la mécanotransduction, en s’intégrant à la signalisation des GTPases de la famille Rho et aux réseaux de protéines liant l’actine. En biologie humaine, une perturbation des dynamiques du cytosquelette dépendantes d’ACTG1 peut modifier le trafic intracellulaire et l’architecture cellulaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du développement tissulaire et des réponses au stress. Des variations génétiques ou une dérégulation affectant ACTG1 ont été associées à des phénotypes liés au cytosquelette, notamment certaines formes de surdité neurosensorielle et des troubles impliquant une motilité et une structure cellulaires altérées.

ACTG1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACTG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACTG1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACTG1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACTG1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.