Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTC1 (m): sc-418966

Présentation

Actc1 code l’actine alpha cardiaque (ACTC1), un composant majeur du filament fin sarcomérique qui polymérise en F‑actine et soutient la production de force dans le muscle strié. ACTC1 agit de concert avec la myosine, la tropomyosine et le complexe troponine pour réguler la contraction dépendante du Ca2+, contribuant à l’assemblage des myofibrilles, à l’organisation des sarcomères et à la mécanotransduction du cytosquelette. Chez la souris, Actc1 joue un rôle essentiel dans le développement et le remodelage des muscles cardiaque et squelettique, reliant la dynamique des filaments d’actine à des voies qui gouvernent la contractilité, la structure cellulaire et les réponses au stress. Des perturbations génétiques et fonctionnelles d’ACTC1 sont associées à des phénotypes liés aux cardiomyopathies et à une fonction musculaire anormale, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour étudier des modifications pertinentes pour la maladie affectant l’intégrité du sarcomère et la physiologie cardiaque.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTC1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Actc1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Actc1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Actc1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACTC1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Actc1 pour l'étude de la signalisation de ACTC1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Actc1 essentiels à la fonction de ACTC1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Actc1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACTC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACTC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Actc1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACTC1 plasmide HDR (m) et le ACTC1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Actc1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Actc1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.