Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACTC1: sc-400008-ACT

ACTC1 code l’actine alpha cardiaque, un composant essentiel du filament fin sarcomérique qui polymérise en F‑actine afin de soutenir la production de force et la mécanique contractile dans le muscle strié. En interagissant avec les moteurs de myosine et des régulateurs se liant à l’actine, ACTC1 contribue à l’assemblage des myofibrilles, à l’organisation du cytosquelette et aux voies de mécanotransduction qui coordonnent la structure et la fonction des cardiomyocytes. Une perturbation de l’expression d’ACTC1 ou de l’intégrité des filaments peut modifier la dynamique du sarcomère et le couplage avec la gestion du calcium, reliant ce gène à des phénotypes de cardiomyopathies héréditaires et à des malformations cardiaques congénitales. En tant qu’isoforme d’actine enrichie dans le muscle, ACTC1 est également utilisée pour étudier le remodelage du cytosquelette spécifique aux isoformes et les réponses au stress dans des modèles de muscle cardiaque et squelettique.

ACTC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACTC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACTC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACTC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACTC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACTC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACTC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACTC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACTC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ACTC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.