Plasmide Double Nickase (h) ACTA2: sc-400003-NIC

ACTA2 code l’actine α des muscles lisses (ACTA2), une protéine majeure des filaments contractiles, fortement exprimée dans les cellules musculaires lisses vasculaires et les myofibroblastes. En polymérisant en F‑actine au sein de fibres de stress et en s’associant aux moteurs de myosine, ACTA2 contribue à la tension du cytosquelette, à la dynamique des adhérences focales et aux programmes de mécanotransduction qui modèlent la migration cellulaire et le remodelage de la matrice extracellulaire. L’activité d’ACTA2 s’inscrit à l’interface des voies de signalisation RhoA/ROCK, de la différenciation induite par le TGF‑β et du contrôle transcriptionnel SRF/MRTF de l’expression des gènes contractiles. La dérégulation ou les mutations d’ACTA2 sont impliquées dans des dysfonctions des cellules musculaires lisses vasculaires et des phénotypes de remodelage, notamment un risque accru d’anévrysme/dissection de l’aorte thoracique, et sont largement étudiées dans les contextes de fibrose et de contractilité anormale.

ACTA2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACTA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACTA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACTA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACTA2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.