Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTA2 (h): sc-400003
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- ACTA2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique ACTA2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: α-Actin Antibody (1A4): sc-32251
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTA2 (h) | sc-400003 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
ACTA2 code l’actine alpha des muscles lisses (α-SMA), un composant essentiel de l’appareil contractile des cellules musculaires lisses vasculaires et des myofibroblastes activés. ACTA2 s’intègre aux fibres de stress d’actine pour réguler la contractilité cellulaire, l’organisation du cytosquelette et la mécanotransduction, influençant des processus tels que la migration, l’adhésion et le remodelage de la matrice extracellulaire. Via la dynamique de l’actine et la signalisation contractile dépendante de RhoA/ROCK, ACTA2 contribue au tonus vasculaire et aux réponses liées à la rigidité tissulaire. Une expression ou une fonction dérégulée d’ACTA2 est associée à la pathobiologie vasculaire et au remodelage fibroprolifératif, ce qui souligne sa pertinence dans les études portant sur la différenciation des muscles lisses et les phénotypes associés à la fibrose.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTA2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ACTA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ACTA2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ACTA2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACTA2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ACTA2 pour l'étude de la signalisation de ACTA2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de ACTA2 essentiels à la fonction de ACTA2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ACTA2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le ACTA2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ACTA2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ACTA2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le ACTA2 plasmide HDR (h) et le ACTA2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ACTA2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ACTA2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.