Plasmide Double Nickase (h) ACTA1: sc-400005-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ACTA1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ACTA1 Double Nickase (h) et le plasmide ACTA1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ACTA1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: α-Actin Antibody (733H2P): sc-517660
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ACTA1 | sc-400005-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ACTA1 | sc-400005-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACTA1 code l’actine alpha du muscle squelettique, un composant majeur du filament mince sarcomérique qui polymérise en F‑actine pour soutenir l’assemblage des myofibrilles, la production de force et la mécanotransduction. La dynamique de l’actine pilotée par ACTA1 s’articule avec le cycle des ponts actine–myosine, l’organisation du disque Z et les voies de remodelage du cytosquelette qui régissent la structure des fibres musculaires et les performances contractiles. Des variations pathogènes ou une expression dérégulée d’ACTA1 sont associées à des maladies héréditaires du muscle squelettique, notamment des myopathies congénitales, où une stabilité altérée des filaments et une mécanique contractile perturbée contribuent au dysfonctionnement cellulaire. En tant que marqueur et nœud fonctionnel en biologie musculaire, ACTA1 est largement étudié dans des modèles de myogenèse, la biogenèse des sarcomères et les réponses au stress du cytosquelette.
ACTA1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACTA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACTA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACTA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACTA1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.