ACTA1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400005-NIC

ACTA1は、筋節の薄フィラメントを構成する主要成分である骨格筋αアクチンをコードしており、重合してF-アクチンとなることで、筋原線維の組み立て、力の発生、ならびにメカノトランスダクション（機械刺激の情報伝達）を支えます。ACTA1によって駆動されるアクチン動態は、アクチン—ミオシンのクロスブリッジサイクル、Zディスクの組織化、そして筋線維の構造と収縮機能を規定する細胞骨格リモデリング経路と連動しています。ACTA1の病的変異や発現制御の破綻は、先天性ミオパチーを含む遺伝性骨格筋疾患と関連しており、フィラメント安定性や収縮力学の異常が細胞機能障害に寄与します。筋生物学におけるマーカーであり機能的ハブとして、ACTA1は筋形成モデル、筋節形成（サルコメア生合成）、および細胞骨格ストレス応答の研究で広く用いられています。

ACTA1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACTA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACTA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACTA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACTA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。