Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTA1 (h): sc-400005
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- ACTA1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique ACTA1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: α-Actin Antibody (733H2P): sc-517660
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTA1 (h) | sc-400005 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
ACTA1 code l’alpha-actine du muscle squelettique, un composant essentiel des filaments fins qui polymérise en F-actine pour soutenir l’assemblage du sarcomère, la contractilité myofibrillaire et l’architecture du cytosquelette. Par ses interactions avec la tropomyosine, la troponine et des protéines liant l’actine, ACTA1 contribue à une dynamique actomyosine régulée, à la mécanotransduction et à la transmission de la force dans le muscle strié. Une altération de la fonction d’ACTA1 perturbe l’organisation des sarcomères et l’intégrité des fibres musculaires, et est associée à des myopathies squelettiques héréditaires, notamment la myopathie némaline et d’autres troubles musculaires congénitaux. En tant que gène structurel fortement exprimé dans le muscle, ACTA1 est également utilisé comme marqueur dans les études de la myogenèse, de la différenciation musculaire et du remodelage du cytosquelette.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTA1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ACTA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ACTA1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ACTA1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACTA1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ACTA1 pour l'étude de la signalisation de ACTA1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de ACTA1 essentiels à la fonction de ACTA1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ACTA1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le ACTA1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ACTA1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ACTA1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le ACTA1 plasmide HDR (h) et le ACTA1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ACTA1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ACTA1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.