Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACSVL6: sc-405327-ACT

SLC27A5 code pour ACSVL6, une acyl‑CoA synthétase des acides gras à très longue chaîne qui catalyse l’activation, dépendante de l’ATP, des acides gras à chaîne longue et très longue en thioesters d’acyl‑CoA, une étape clé qui conditionne l’utilisation des acides gras. En contrôlant la disponibilité des acyl‑CoA, ACSVL6 influence les processus de gestion des lipides, notamment la β‑oxydation, le remodelage des triglycérides et, plus largement, les flux métaboliques au sein des voies de synthèse et de dégradation des lipides. Des altérations de l’activation des acides gras et du métabolisme des acyl‑CoA sont associées à une homéostasie lipidique perturbée, avec un lien avec des états de stress métabolique touchant des voies centrées sur le foie et l’équilibre énergétique systémique. Par conséquent, SLC27A5 est fréquemment étudié dans le contexte du métabolisme lipidique, de l’adaptation énergétique cellulaire et des voies de signalisation associées aux maladies métaboliques.

ACSVL6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC27A5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACSVL6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC27A5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC27A5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACSVL6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC27A5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACSVL6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACSVL6 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC27A5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.