Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACSVL5: sc-401578-ACT

Le gène humain **SLC27A1** code **ACSVL5 (FATP1)**, une acyl‑CoA synthétase des acides gras à longue chaîne qui catalyse l’activation, dépendante de l’ATP, des acides gras à longue chaîne en acyl‑CoA, couplant ainsi l’absorption des lipides à leur utilisation métabolique intracellulaire. En orientant les acides gras vers la **β‑oxydation**, la biosynthèse des **triglycérides** et des **phospholipides**, ainsi que la dynamique des **gouttelettes lipidiques**, ACSVL5 contribue à façonner l’équilibre énergétique cellulaire et le remodelage des membranes. L’activité de SLC27A1 s’interface avec les programmes lipidiques régulés par les **PPAR** et influence les flux lipidiques mitochondriaux et du réticulum endoplasmique (RE), reliant la disponibilité en nutriments à la signalisation métabolique. Une gestion dérégulée des acides gras impliquant SLC27A1 a été associée à des phénotypes métaboliques et à des voies de stress cellulaire induites par les lipides, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la sensibilité à l’insuline, de l’inflammation et de la reprogrammation métabolique dans des modèles de maladie.

ACSVL5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC27A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACSVL5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC27A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC27A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACSVL5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC27A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACSVL5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACSVL5 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC27A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.