Plasmide Double Nickase (h) ACSS1: sc-403211-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ACSS1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ACSS1 Double Nickase (h) et le plasmide ACSS1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ACSS1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ACSS1 Antibody (D-7): sc-377149
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ACSS1 | sc-403211-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ACSS1 | sc-403211-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACSS1 code une acyl‑CoA synthétase mitochondriale qui catalyse la conversion de l’acétate en acétyl‑CoA, reliant l’utilisation de l’acétate au métabolisme énergétique mitochondrial et au flux anaplérotique à travers le cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs). En fournissant de l’acétyl‑CoA pour le métabolisme oxydatif et en soutenant des voies associées aux lipides et aux corps cétoniques, ACSS1 contribue à la flexibilité métabolique en situation de stress nutritionnel et lorsque la disponibilité des substrats est modifiée. Une dérégulation du métabolisme de l’acétate et de la production mitochondriale d’acétyl‑CoA est pertinente pour l’étude de la reprogrammation métabolique observée en biologie du cancer, dans la résistance à l’insuline et dans d’autres troubles caractérisés par une altération du métabolisme oxydatif. ACSS1 constitue donc une cible utile pour étudier le choix des substrats mitochondriaux, la compartimentation de l’acétyl‑CoA et les effets en aval sur l’équilibre redox et la bioénergétique cellulaire.
ACSS1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACSS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACSS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACSS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACSS1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.