Plasmide Double Nickase (m) ACSL5: sc-436628-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ACSL5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ACSL5 Double Nickase (m) et le plasmide ACSL5 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Acsl5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ACSL5 Antibody (A-2): sc-365478
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) ACSL5 | sc-436628-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) ACSL5 | sc-436628-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Acsl5* code l’acyl‑CoA synthétase, membre 5 de la famille des enzymes spécifiques des acides gras à longue chaîne (ACSL5), une enzyme associée aux mitochondries et au réticulum endoplasmique qui active les acides gras à longue chaîne en les convertissant en acyl‑CoA. Cette réaction engage les acides gras dans la β‑oxydation, la biosynthèse des triglycérides et des phospholipides, ainsi que le remodelage de la composition lipidique membranaire, influençant ainsi l’énergétique cellulaire et les réponses au stress lipotoxique. L’activité d’ACSL5 s’inscrit au croisement de voies qui contrôlent la fonction mitochondriale, le métabolisme oxydatif et la dynamique des gouttelettes lipidiques, et elle peut moduler la signalisation inflammatoire via des modifications des médiateurs lipidiques. Une expression ou une activité d’ACSL5 dérégulée a été associée à des phénotypes métaboliques, notamment la stéatose hépatique et des processus liés à la résistance à l’insuline, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur la biologie des maladies métaboliques.
ACSL5 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Acsl5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Acsl5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Acsl5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Acsl5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.