Plasmide Double Nickase (m) ACSL4: sc-424503-NIC

Le gène murin **Acsl4** code l'acyl-CoA synthétase, membre 4 de la famille des chaînes longues (ACSL4), une enzyme qui convertit des acides gras polyinsaturés à longue chaîne, tels que l'acide arachidonique et l'acide adrénïque, en leurs dérivés acyl-CoA afin de les incorporer dans les phospholipides membranaires. En modulant le remodelage des phospholipides et la disponibilité des médiateurs lipidiques, ACSL4 influence la sensibilité à la ferroptose, le métabolisme oxydatif des lipides et la dynamique membranaire liée aux réponses cellulaires au stress. L'activité d'ACSL4 recoupe des voies qui régulent la peroxydation lipidique et la signalisation inflammatoire, et des altérations d'expression ou de fonction ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux, à une dysrégulation métabolique et à des modifications dépendantes du contexte en biologie tumorale. Ces propriétés font d'**Acsl4** une cible utile pour étudier, dans des modèles murins, les mécanismes de mort cellulaire induits par les lipides, l'homéostasie rédox et la composition des membranes.

ACSL4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Acsl4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Acsl4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Acsl4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Acsl4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.