Plasmide CRISPR d'Activation (m) ACSL4: sc-424503-ACT

Le gène murin **Acsl4** code l’acyl‑CoA synthétase membre 4 de la famille des acyl‑CoA synthétases à longue chaîne (ACSL4), une enzyme associée aux membranes qui active les acides gras polyinsaturés à longue chaîne en les convertissant en thioesters d’acyl‑CoA, afin de permettre leur incorporation dans les phospholipides et leur entrée dans des voies métaboliques lipidiques en aval. ACSL4 est un déterminant majeur du remodelage des phospholipides et de la composition membranaire sensible à l’état rédox, reliant l’utilisation des lipides aux réponses au stress oxydant et à la sensibilité à la ferroptose. En régulant le métabolisme de l’acide arachidonique et de l’acide adrénique, ACSL4 influence la signalisation lipidique inflammatoire, la fonction mitochondriale et la dynamique membranaire. Des altérations de l’activité et de l’expression d’ACSL4 ont été associées à des pathologies liées à la peroxydation lipidique et ont été étudiées notamment dans des contextes de neurodégénérescence, de dysfonction métabolique et d’adaptation des cellules cancéreuses au stress.

ACSL4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Acsl4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACSL4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Acsl4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Acsl4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACSL4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Acsl4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACSL4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACSL4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Acsl4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.