Plasmide Double Nickase (m) ACSL1: sc-420278-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ACSL1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ACSL1 Double Nickase (m) et le plasmide ACSL1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Acsl1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) ACSL1 | sc-420278-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Acsl1* code l’acyl‑CoA synthétase 1, membre de la famille des acyl‑CoA synthétases pour acides gras à longue chaîne (ACSL1), une enzyme qui convertit les acides gras libres à longue chaîne en leurs thioesters acyl‑CoA correspondants, une étape de contrôle qui engage les lipides dans le métabolisme en aval. ACSL1 soutient la β‑oxydation mitochondriale, le stockage et le remodelage des lipides, ainsi que l’homéostasie énergétique au sens large, en contrôlant la disponibilité des acyl‑CoA pour des voies comprenant la synthèse des triglycérides, le renouvellement des phospholipides et le catabolisme des acides gras. Dans les tissus métaboliquement actifs et dans des contextes impliquant des cellules immunitaires, l’activité d’ACSL1 influence la signalisation induite par les lipides et les programmes inflammatoires, reliant la régulation d’*Acsl1* aux réponses au stress métabolique. Une expression ou une activité altérée d’ACSL1 est associée à des phénotypes de dérégulation du métabolisme lipidique, pertinents pour des modèles murins de résistance à l’insuline, de stéatose et de maladies cardiométaboliques.
ACSL1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Acsl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Acsl1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Acsl1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Acsl1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.