Plasmide CRISPR d'Activation (m) ACSL1: sc-420278-ACT

Le gène murin *Acsl1* code la synthétase 1 des acyl-CoA à longue chaîne (ACSL1), une enzyme qui active les acides gras à longue chaîne en les convertissant en thioesters d’acyl-CoA, engageant ainsi les substrats lipidiques dans la β‑oxydation, le remodelage des phospholipides et la synthèse des triglycérides. ACSL1 contribue à coordonner l’homéostasie énergétique cellulaire et la gestion des lipides via des voies associées aux mitochondries et au réticulum endoplasmique, influençant des processus tels que la dynamique des gouttelettes lipidiques et la composition membranaire. Les altérations de l’activité d’ACSL1 et de ses profils d’expression sont fréquemment étudiées dans le contexte de l’inflammation métabolique, de la résistance à l’insuline, de la stéatose hépatique et du remodelage lipidique pertinent pour les maladies cardiovasculaires, où des changements des pools d’acyl‑CoA peuvent reprogrammer la signalisation et la fonction mitochondriale. Par conséquent, *Acsl1* constitue un nœud utile pour disséquer le métabolisme des acides gras, la détection des nutriments et les réponses au stress induites par les lipides dans des modèles murins et des systèmes cellulaires.

ACSL1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Acsl1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACSL1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Acsl1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Acsl1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACSL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Acsl1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACSL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACSL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Acsl1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.