ACRV1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418963

Panoramica

Acrv1 codifica la proteina della vescicola acrosomiale 1 (ACRV1), un componente dell’acrosoma dello spermatozoo arricchito nel testicolo che contribuisce alla biogenesi dell’acrosoma e all’architettura molecolare necessaria per la fecondazione. Negli spermatidi di topo, ACRV1 supporta le fasi tardive della spermiogenesi, inclusi la formazione dell’acrosoma, il rimodellamento della testa dello spermatozoo e gli eventi di maturazione che influenzano le interazioni con la zona pellucida e la reazione acrosomiale. La disregolazione delle proteine acrosomiali è associata a una ridotta funzionalità spermatica e a fenotipi di subfertilità maschile, rendendo Acrv1 un utile punto di partenza genetico per lo studio della biologia riproduttiva. Questo gene è spesso utilizzato per analizzare i programmi di differenziazione delle cellule germinali e le vie correlate all’acrosoma che sono alla base della qualità dello sperma e della competenza alla fecondazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACRV1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acrv1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acrv1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acrv1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACRV1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acrv1 per lo studio della segnalazione di ACRV1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Acrv1 critici per la funzione di ACRV1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acrv1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACRV1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACRV1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acrv1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACRV1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACRV1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acrv1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acrv1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.