Plasmide CRISPR d'Activation (m2) ACOX1: sc-418948-ACT-2

Le gène murin Acox1 code l’acyl‑CoA oxydase 1 (ACOX1), une flavoprotéine peroxysomale qui catalyse la première étape, limitante de la vitesse, de la β‑oxydation des acyl‑CoA d’acides gras à chaîne linéaire, produisant du trans‑2‑énoyl‑CoA et contribuant au catabolisme lipidique dépendant des peroxysomes. L’activité d’ACOX1 participe au maintien de l’homéostasie lipidique et énergétique cellulaire et s’articule avec la biogenèse des peroxysomes, la régulation du stress oxydant via la production de H2O2, ainsi qu’avec des réseaux de signalisation métabolique tels que les programmes transcriptionnels pilotés par les PPAR. Une dérégulation d’Acox1 est associée à une altération du renouvellement des acides gras à très longue chaîne, à une accumulation lipidique hépatique, à l’inflammation et à des phénotypes plus larges touchant le métabolisme peroxysomal, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes de la stéatose hépatique et du remodelage métabolique. L’édition du gène ou d’autres perturbations génétiques d’Acox1 chez la souris sont utiles pour disséquer les voies de β‑oxydation peroxysomale, les signatures lipidomiques et les conséquences, spécifiques d’un organe ou d’un type cellulaire, de la dysfonction peroxysomale dans des modèles de recherche biomédicale.

ACOX1 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Acox1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACOX1 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Acox1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Acox1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACOX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Acox1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACOX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACOX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Acox1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.