Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACLP/AEBP1: sc-403540-ACT

AEBP1 code la protéine 1 se liant aux enhancers des adipocytes, également connue sous le nom d’ACLP, une protéine associée à la matrice extracellulaire impliquée dans l’organisation du collagène, la différenciation des cellules mésenchymateuses et la régulation du remodelage tissulaire. Dans les cellules humaines, l’activité d’AEBP1 est liée à des programmes d’activation des fibroblastes ainsi qu’à des interactions avec la signalisation TGF-β/SMAD et les voies d’adhésion médiées par les intégrines, qui coordonnent le dépôt de matrice extracellulaire et la perception de la rigidité. Une expression dérégulée d’AEBP1 a été associée à des phénotypes fibrosants et au remodelage stromal observés dans divers microenvironnements inflammatoires et dans le stroma associé aux tumeurs. Ces caractéristiques font d’AEBP1 un levier moléculaire utile pour étudier la biologie de la matrice, la signalisation cellule–matrice et les programmes transcriptionnels qui régissent l’homéostasie du tissu conjonctif.

ACLP/AEBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AEBP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACLP/AEBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AEBP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AEBP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACLP/AEBP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AEBP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACLP/AEBP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACLP/AEBP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de AEBP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.