Acid Ceramidase Double Nickase Plasmid (m): sc-419216-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Acid Ceramidase Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Acid Ceramidase Double-Nickase-Plasmid (m) und Acid Ceramidase Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Asah1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Acid Ceramidase Double Nickase Plasmid (m) | sc-419216-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Acid Ceramidase Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419216-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Asah1-Gen kodiert die saure Ceramidase, eine lysosomale Hydrolase, die Ceramid zu Sphingosin und freien Fettsäuren deacyliert und damit das Gleichgewicht zwischen der Ceramid- und der Sphingosin-1-phosphat-Signalgebung steuert. Über die Regulation des Sphingolipid-Umsatzes beeinflusst die saure Ceramidase die Membranzusammensetzung, die endolysosomale Homöostase, die Autophagie sowie Stressantwortwege, die mit Apoptose- und Entzündungssignalen verknüpft sind. Eine Störung des ASAH1-abhängigen Ceramidabbaus beeinträchtigt die lysosomale Lipid-Clearance und verändert die Pools bioaktiver Sphingolipide – Prozesse, die mit Neurodegeneration und systemischen Lipidspeicher-Phänotypen in Verbindung gebracht werden. Asah1 ist daher ein zentraler Ansatzpunkt, um lysosomale Funktionen und sphingolipidgetriebene Signalnetzwerke in murinen Zell- und In-vivo-Modellen zu untersuchen.
Acid Ceramidase Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Asah1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Asah1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Asah1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Asah1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.