Plasmide CRISPR/Cas9 KO AChE (h): sc-401091

Présentation

Le gène humain **ACHE** code l’acétylcholinestérase (AChE), une hydrolase à sérine qui met fin à la neurotransmission cholinergique en hydrolysant rapidement l’acétylcholine au niveau des synapses et des jonctions neuromusculaires. Au-delà de la signalisation synaptique canonique, l’activité de l’AChE influence le couplage excitation–contraction, la régulation autonome et la signalisation cholinergique anti-inflammatoire en modulant la disponibilité de l’acétylcholine. Des altérations de l’expression d’ACHE et une dérégulation enzymatique ont été associées à des modifications du fonctionnement des réseaux neuronaux, à des voies liées au stress et à la neuroinflammation, ainsi qu’à une susceptibilité à des phénotypes neuromusculaires et neurodégénératifs. En tant qu’enzyme à la fois ancrée à la membrane et soluble, avec des isoformes spécifiques des tissus, ACHE est fréquemment étudié dans des modèles de physiologie synaptique, de réponse aux toxiques et de dialogue entre voies de signalisation cholinergiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AChE (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ACHE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ACHE, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ACHE à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AChE.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ACHE pour l'étude de la signalisation de AChE, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ACHE essentiels à la fonction de AChE
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ACHE pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AChE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le AChE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ACHE. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AChE plasmide HDR (h) et le AChE (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ACHE pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ACHE définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.