Plasmide Double Nickase (h) ACCα: sc-401102-NIC

ACACA code l’acétyl‑CoA carboxylase alpha (ACCα), une enzyme biotine‑dépendante qui catalyse, de manière ATP‑dépendante, la conversion de l’acétyl‑CoA en malonyl‑CoA, étape d’engagement de la synthèse de novo des acides gras. En contrôlant les niveaux de malonyl‑CoA, ACCα coordonne le flux anabolique lipidique et régule indirectement la β‑oxydation mitochondriale des acides gras via l’inhibition de CPT1, reliant l’état nutritionnel à l’homéostasie énergétique. L’activité d’ACCα s’intègre aux signaux de l’AMPK et à des programmes transcriptionnels sensibles aux lipides, façonnant la biogenèse membranaire, la formation des gouttelettes lipidiques et la répartition de l’acétyl‑CoA. Une expression ou une activité dérégulée d’ACACA a été associée à des phénotypes de maladies métaboliques ainsi qu’à des vulnérabilités lipido‑dépendantes du métabolisme des cellules cancéreuses, ce qui soutient son utilisation dans les études de reprogrammation métabolique et de lipogenèse.

ACCα Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACACA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACACA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACACA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACACA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.