Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACBP (m): sc-419950

Présentation

Dbi code pour l’acyl-CoA–binding protein (ACBP), une chaperonne lipidique conservée qui se lie aux esters d’acyl-CoA à chaîne moyenne et longue et en régule la disponibilité intracellulaire. Dans les cellules murines, l’ACBP soutient le trafic des acides gras et l’homéostasie métabolique en influençant la β‑oxydation, la synthèse lipidique et le remodelage des lipides membranaires, et elle peut moduler des réseaux de signalisation liés à l’équilibre énergétique et aux réponses au stress cellulaire. Par ces fonctions, DBI/ACBP est couramment étudiée dans des voies reliant le métabolisme lipidique à la fonction mitochondriale, à l’autophagie et à l’inflammation. Une gestion dérégulée des acyl-CoA et des flux lipidiques est pertinente dans des modèles de dysfonction métabolique, de neurobiologie et de dépendance lipidique des cellules tumorales, ce qui fait de Dbi une cible utile pour des études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACBP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Dbi dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Dbi, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Dbi à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACBP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Dbi pour l'étude de la signalisation de ACBP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Dbi essentiels à la fonction de ACBP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Dbi pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Dbi. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACBP plasmide HDR (m) et le ACBP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Dbi pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Dbi définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.