ACAT-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403419-ACT

O ACAT2 humano codifica a acil-CoA:colesterol aciltransferase 2 (ACAT-2), uma enzima de membrana do retículo endoplasmático que esterifica o colesterol livre com acil-CoAs de ácidos graxos de cadeia longa para gerar ésteres de colesterol. Essa reação contribui para o tamponamento intracelular do colesterol, a formação de gotículas lipídicas e a montagem de lipoproteínas, conectando a atividade da ACAT-2 à homeostase de esteróis e a programas mais amplos do metabolismo lipídico. A função da ACAT-2 se cruza com vias que regulam o tráfego de colesterol, a síntese de lipídios controlada por SREBP e as respostas celulares ao estresse lipotóxico ou oxidativo. A desregulação do metabolismo de ésteres de colesterol tem sido associada a fenótipos metabólicos e à biologia do risco cardiovascular, tornando o ACAT2 um alvo útil para estudos mecanísticos em modelos relevantes de hepatócitos e intestino.

ACAT-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACAT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACAT-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACAT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACAT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACAT-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACAT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACAT-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACAT-2 em células tumorais com expressão de ACAT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.