Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACADS (m): sc-418940

Présentation

Acads code l’acyl‑CoA déshydrogénase à chaîne courte (ACADS), une flavoprotéine mitochondriale qui catalyse la première étape de déshydrogénation de la β‑oxydation des acides gras à chaîne courte. En favorisant la production d’acétyl‑CoA et le flux en aval du cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs), ACADS contribue au maintien de l’homéostasie énergétique en période de jeûne et lors d’une utilisation accrue des lipides, et participe à l’équilibre rédox via un transfert d’électrons dépendant du FAD. Une altération de l’activité d’ACADS est associée à une accumulation d’acyl‑CoA à chaîne courte et à des profils d’acylcarnitines modifiés, ce qui la rend pertinente pour les erreurs innées de l’oxydation des acides gras et certains phénotypes de stress métabolique. Dans des modèles murins, Acads est fréquemment étudié dans le foie, le cœur, le muscle squelettique et le tissu adipeux brun afin de mieux comprendre le métabolisme mitochondrial, la détection des nutriments et l’équilibre énergétique systémique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACADS (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Acads dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Acads, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Acads à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACADS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Acads pour l'étude de la signalisation de ACADS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Acads essentiels à la fonction de ACADS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Acads pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACADS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACADS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Acads. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACADS plasmide HDR (m) et le ACADS (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Acads pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Acads définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.