ACADS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418940

Descripción general

Acads codifica la acil‑CoA deshidrogenasa de cadena corta (ACADS), una flavoproteína mitocondrial que cataliza el primer paso de deshidrogenación en la β‑oxidación de los ácidos grasos de cadena corta. Al favorecer la producción de acetil‑CoA y el flujo posterior a través del ciclo del ácido tricarboxílico (TCA), ACADS ayuda a mantener la homeostasis energética durante el ayuno y la utilización de dietas ricas en grasas, y participa en el equilibrio redox mediante la transferencia de electrones dependiente de FAD. La alteración de la actividad de ACADS se asocia con la acumulación de acil‑CoA de cadena corta y con perfiles de acilcarnitinas modificados, por lo que es relevante en errores congénitos de la oxidación de ácidos grasos y en fenotipos de estrés metabólico. En modelos murinos, Acads se estudia comúnmente en hígado, corazón, músculo esquelético y tejido adiposo pardo para comprender el metabolismo mitocondrial, el sensado de nutrientes y el equilibrio energético sistémico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ACADS (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Acads en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Acads junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Acads tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ACADS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Acads para la investigación de la señalización de ACADS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Acads críticos para la función de ACADS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Acads para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ACADS CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ACADS CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Acads. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ACADS (m) y el plásmido HDR ACADS (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Acads para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Acads definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.