ABP1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-410674-LAC

AOC1 kodiert die kupferhaltige Aminoxidase 1 (ABP1/DAO), ein sezerniertes und membranassoziiertes Enzym, das die oxidative Desaminierung primärer Amine katalysiert, darunter Histamin und Polyamine, wobei Aldehyde, Ammoniak und Wasserstoffperoxid entstehen. Über die Regulation des Umsatzes biogener Amine und der Bildung reaktiver Sauerstoffspezies beeinflusst AOC1 inflammatorische Signalwege, die Funktion der epithelialen Barriere und die zelluläre Redox-Homöostase. Die ABP1-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die mit mukosaler Immunität, Gefäßbiologie und Umbau der extrazellulären Matrix verknüpft sind; zudem wurde eine veränderte Expression in Zusammenhängen beschrieben, die Entzündung, Allergie und Phänotypen der Tumormikroumgebung betreffen. Diese Eigenschaften machen AOC1 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien des Histaminstoffwechsels, von oxidativen Stressantworten und der Zell-Zell-Kommunikation in humanen Modellsystemen.

ABP1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente AOC1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ABP1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der AOC1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ABP1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen AOC1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.