Plásmido CRISPR de Activación (m) Abin-1: sc-425441-ACT

El gen Tnip1 de ratón codifica ABIN-1 (inhibidor de NF-κB que se une a A20), un adaptador de unión a ubiquitina que limita la señalización inflamatoria aguas abajo del receptor de TNF, los receptores tipo Toll y las vías del receptor de IL‑1. ABIN-1 coopera con la desubiquitinasa A20/TNFAIP3 para modular la señalización por ubiquitina K63 y lineal (M1) en complejos que contienen RIPK1 y NEMO/IKK, moldeando así las salidas transcripcionales de NF‑κB y MAPK. A través de estas interacciones, ABIN-1 influye en la activación de la inmunidad innata, la producción de citocinas y las vías de supervivencia, lo que lo hace relevante para modelos de autoinmunidad, enfermedad inflamatoria y patología tisular impulsada por el sistema inmunitario. Además, ABIN-1 se ha vinculado con la regulación de respuestas al estrés celular y puede afectar fenotipos proliferativos en contextos donde la señalización de NF‑κB está desregulada.

Abin-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Tnip1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Abin-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Tnip1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Tnip1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Abin-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Tnip1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Abin-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Abin-1 en células tumorales con expresión de Tnip1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.