Plasmide CRISPR d'Activation (h) ABCG8: sc-402453-ACT

ABCG8 code un demi-transporteur de la famille des transporteurs ABC (ATP-binding cassette) qui s’hétérodimérise avec ABCG5 pour former une pompe d’efflux des stérols fonctionnelle à la membrane apicale des entérocytes et à la membrane canaliculaire des hépatocytes. Ce complexe limite l’absorption intestinale et favorise l’excrétion biliaire des stérols alimentaires, contribuant à l’homéostasie du cholestérol et des phytostérols à l’échelle de l’organisme via des voies coordonnées de transport et de gestion des lipides. Une altération de l’activité d’ABCG8 perturbe le trafic des stérols et est associée à une dérégulation des profils plasmatiques de stérols ainsi qu’à des phénotypes héréditaires d’accumulation de stérols, notamment des tableaux cliniques de type sitostérolémie. En conséquence, ABCG8 est largement étudié dans le cadre de la régulation métabolique, de la biologie du transport lipidique et des relations génotype–phénotype du métabolisme des stérols.

ABCG8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABCG8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ABCG8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABCG8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABCG8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ABCG8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABCG8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ABCG8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ABCG8 dans les cellules tumorales présentant une expression de ABCG8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.