Particules Lentivirales d'Activation (h) ABCA13: sc-407004-LAC

ABCA13 code un transporteur de la cassette de liaison à l’ATP (ABC) de la sous-famille ABCA, qui couple l’hydrolyse de l’ATP au déplacement transmembranaire de lipides et d’autres substrats hydrophobes apparentés. Bien que la spécificité exacte de ses substrats fasse encore l’objet de recherches actives, ABCA13 est impliqué dans l’organisation des lipides membranaires, le trafic vésiculaire et des processus d’homéostasie cellulaire qui influencent la différenciation épithéliale et la biologie des barrières. L’expression et les variations génétiques d’ABCA13 ont été associées à des phénotypes altérés de gestion des lipides et ont été étudiées dans le contexte de la biologie pulmonaire et tumorale, notamment via des liens avec le comportement des tumeurs et des mécanismes de maladies respiratoires. Ces caractéristiques font d’ABCA13 une cible utile pour l’étude des réseaux de transport lipidique, de la dynamique membranaire et des programmes transcriptionnels modulant l’état cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales ABCA13 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ABCA13 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ABCA13 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ABCA13, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ABCA13. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ABCA13 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.