Particules Lentivirales d'Activation (h) ABC1: sc-401086-LAC

ABCA1 (ABC1) humain est un transporteur de la superfamille des « ATP-binding cassette » qui assure l’efflux du cholestérol et des phospholipides vers l’apolipoprotéine A‑I, initiant la biogenèse des HDL naissantes et maintenant l’homéostasie lipidique cellulaire. L’activité d’ABC1 influence le transport inverse du cholestérol et s’articule avec la signalisation des récepteurs LXR (liver X receptor)/RXR (retinoid X receptor), la composition des microdomaines membranaires et la formation de cellules spumeuses macrophagiques. En régulant la charge intracellulaire en stérols, ABCA1 module la signalisation inflammatoire et les réponses au stress oxydatif dans les cellules riches en lipides. Une dérégulation ou une perte de fonction d’ABCA1 est associée à une formation altérée des HDL et à des phénotypes d’accumulation lipidique pertinents pour la biologie de l’athérosclérose et la recherche sur les maladies métaboliques.

Les particules d'activation lentivirales ABC1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ABCA1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ABC1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ABCA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ABC1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ABCA1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.