Plasmide CRISPR/Cas9 KO AANAT (m): sc-418927

Présentation

Le gène murin **Aanat** code l’arylalkylamine N‑acétyltransférase (AANAT), une enzyme limitante de la biosynthèse de la mélatonine qui catalyse la N‑acétylation de la sérotonine en N‑acétylsérotonine dans la glande pinéale et d’autres tissus. L’activité d’AANAT est étroitement régulée par les signaux circadiens via la voie de signalisation AMPc/PKA, une stabilisation dépendante de la phosphorylation et un contrôle transcriptionnel coordonné, reliant le métabolisme cellulaire à l’entraînement par le cycle lumière–obscurité. En modulant la mélatonine et des intermédiaires indolaminiques apparentés, **Aanat** influence la régulation veille–sommeil, la physiologie saisonnière et la signalisation neuroendocrinienne. Une expression ou une activité d’AANAT dérégulée a été associée, dans des systèmes expérimentaux, à une perturbation des rythmes circadiens et à des phénotypes modifiés liés au stress, à l’humeur et au métabolisme, ce qui en fait un nœud utile pour des études centrées sur des voies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AANAT (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aanat dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aanat, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aanat à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AANAT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aanat pour l'étude de la signalisation de AANAT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Aanat essentiels à la fonction de AANAT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aanat pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AANAT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le AANAT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aanat. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AANAT plasmide HDR (m) et le AANAT (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aanat pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aanat définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.