Plásmido Doble Nickase (h) A1Up: sc-407973-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)A1Up consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa A1Up (h) y el plásmido de doble nickasa A1Up (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a UBQLN4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: A1Up Anticuerpo (A333): sc-136145
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) A1Up | sc-407973-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) A1Up | sc-407973-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UBQLN4 (A1Up) codifica una proteína adaptadora tipo ubiquitina implicada en la proteostasis al acoplar sustratos poliubiquitinados a vías de degradación y de control de calidad. A1Up se asocia con el recambio dependiente de ubiquitina e interactúa funcionalmente con componentes del sistema ubiquitina–proteasoma y con la depuración ligada a la autofagia, influyendo en la homeostasis proteica en condiciones basales y de estrés. A través de estas funciones, UBQLN4 puede afectar las respuestas celulares al estrés proteotóxico, la agregación de proteínas y la remodelación de redes de señalización que dependen de una estabilidad proteica regulada. La desregulación del control de calidad proteico mediado por ubiquitina tiene una relevancia amplia en la neurodegeneración, la biología del cáncer y otras afecciones en las que la proteostasis alterada contribuye a la patología, lo que convierte a UBQLN4 en una diana útil para estudios mecanísticos.
A1Up El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus UBQLN4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de UBQLN4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de UBQLN4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con UBQLN4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.