Plasmide Double Nickase (h) A1Up: sc-407973-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) A1Up correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide A1Up Double Nickase (h) et le plasmide A1Up Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant UBQLN4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: A1Up Antibody (A333): sc-136145
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) A1Up | sc-407973-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) A1Up | sc-407973-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UBQLN4 (A1Up) code une protéine adaptatrice de type ubiquitine-like, impliquée dans la protéostasie en reliant des substrats polyubiquitinylés aux voies de dégradation et de contrôle qualité. A1Up est associée au renouvellement dépendant de l’ubiquitine et interagit fonctionnellement avec des composants du système ubiquitine–protéasome ainsi qu’avec l’élimination liée à l’autophagie, influençant l’homéostasie protéique en conditions basales comme en situation de stress. Par ces rôles, UBQLN4 peut moduler les réponses cellulaires au stress protéotoxique, à l’agrégation protéique et au remodelage des réseaux de signalisation qui dépendent d’une stabilité protéique régulée. La dérégulation du contrôle qualité des protéines médié par l’ubiquitine a une portée large en neurodégénérescence, en biologie du cancer et dans d’autres affections où une protéostasie altérée contribue à la pathologie, ce qui fait d’UBQLN4 une cible utile pour des études mécanistiques.
A1Up Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus UBQLN4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de UBQLN4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de UBQLN4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de UBQLN4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.