Plasmide CRISPR d'Activation (h) A1BG: sc-403087-ACT

L’alpha-1B-glycoprotéine (A1BG) code une glycoprotéine plasmatique sécrétée de la superfamille des immunoglobulines, abondante dans la circulation et détectée dans de nombreux tissus. Bien que sa fonction moléculaire précise reste imparfaitement définie, A1BG est impliquée dans des interactions protéine–protéine extracellulaires et dans la modulation des processus immunitaires et inflammatoires, avec des associations rapportées au stress oxydant et à des voies de signalisation liées à la protéostasie dans le milieu extracellulaire. Des altérations de l’expression d’A1BG ont été observées dans divers contextes pathologiques, notamment des états métaboliques et inflammatoires ainsi que plusieurs cancers, ce qui étaye son utilisation comme gène associé à des biomarqueurs pour des études mécanistiques. Dans des modèles cellulaires humains, perturber A1BG offre un moyen d’explorer les voies qui régissent les réseaux de glycoprotéines sécrétées, l’inflammation systémique et la signalisation microenvironnementale associée aux tumeurs.

A1BG Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de A1BG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

A1BG Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus A1BG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription A1BG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de A1BG. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus A1BG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de A1BG au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie A1BG dans les cellules tumorales présentant une expression de A1BG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.