Plasmide CRISPR/Cas9 KO A-Myb (h): sc-404328

Présentation

MYBL1 code le facteur de transcription A-Myb, une protéine se liant à l’ADN de manière spécifique de séquence, qui régule des programmes d’expression génique liés à la progression du cycle cellulaire, à la différenciation et à la prolifération restreinte à certaines lignées. A-Myb agit au sein de réseaux transcriptionnels contrôlant des processus associés à la chromatine et la signalisation des points de contrôle, en influençant l’expression de gènes impliqués dans la réplication de l’ADN et l’entrée en mitose. Une activité de MYBL1 dérégulée ou un contexte régulateur altéré a été associé à des états prolifératifs aberrants et à des programmes transcriptionnels oncogéniques dans plusieurs tissus. En tant que régulateur transcriptionnel nucléaire, A-Myb est fréquemment étudié pour son rôle dans le couplage des signaux développementaux à des sorties transcriptionnelles coordonnées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO A-Myb (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYBL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYBL1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYBL1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine A-Myb.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYBL1 pour l'étude de la signalisation de A-Myb, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYBL1 essentiels à la fonction de A-Myb
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYBL1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le A-Myb plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le A-Myb plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYBL1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le A-Myb plasmide HDR (h) et le A-Myb (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYBL1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYBL1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.